化學(xué)發(fā)光試劑使用方法

化學(xué)發(fā)光試劑使用方法：  

1.印跡膜制備按常規(guī)方法完成SDS-PAGE和電轉(zhuǎn)膜操作，適當(dāng)?shù)姆忾]非常重要。可以通過(guò)標(biāo)記一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯(lián)物。仔細(xì)地淋洗對(duì)于降低背景非常重要，在與HRP交聯(lián)物溫育后，膜片更需仔細(xì)洗滌，所有步驟均在室溫下完成。  

2.化學(xué)發(fā)光試劑的配置在使用前等量混合A液和B液，混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。  

3.蛋白信號(hào)顯現(xiàn)  

1).用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙以吸去過(guò)量試劑。  

2).置膜片于二層保鮮膜之間，小心趕盡氣泡。  

3).將膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。  

4).于暗室中壓上X光片。  

5).根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時(shí)間，一般為1min或5min，也可選擇不同時(shí)間多次壓片，以達(dá)*效果。顯影沖洗。  

6).調(diào)節(jié)曝光時(shí)間，再次曝光顯影。